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如何實現(xiàn)農(nóng)藥殘留ELISA檢測試劑盒產(chǎn)業(yè)化
更新時間:2013-08-15   點擊次數(shù):1718次

 為了使農(nóng)藥殘留ELISA檢測試劑盒能夠被更多人了解,很好的應用于產(chǎn)業(yè)化中,本公司集所有的研究人員進行了這次大規(guī)模的研究,現(xiàn)將研究報告如下:
 本研究以農(nóng)藥三唑磷及克百威為研究對象,采用分子模擬方法對其半抗原分子進行了設計并合成得到了兩種優(yōu)化的三唑磷半抗原兩種半抗原O-乙基,O-[1-苯基-(H-1,2,4-三唑-3-基),N-(3-羧基-丙基)]硫代磷酸胺(THBu)、O-乙基,O-[1-苯基-(H-1,2,4-三唑-3-基),N-(5-羧基-丙基)]硫代磷酸胺(THHe)和一種克百威半抗原4—[[(2,3-二氫-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)。上述半抗原分別與載體蛋白偶聯(lián)制備成人工抗原,免疫小白鼠,再采用雜交瘤技術制備出了對應單克隆抗體。經(jīng)測定,抗體(腹水)的效價均在10~6以上,與對應農(nóng)藥的結構類似物的交叉反應率均較低,表現(xiàn)出很高的特異性。在此基礎上,通過對固相載體、包被緩沖液、有機溶劑、包被條件、洗滌次數(shù)、酶的種類、封閉物種類、點板時間、工作濃度、穩(wěn)定劑以及不同ELISA模式等因素的篩選比較,優(yōu)化了三唑磷和克百威ELISA檢測試劑盒方法和條件。
 優(yōu)化后結果顯示:
1、Costar酶標板(美國)吸附效果和均一性較好;
2、抗體以PBS(pH 7.4,0.01M)作為包被介質較為理想,人工抗原則以CBS(pH 9.5,0.05M)作為包被介質較為理想;
3、包被條件以在37℃下包被2h效果為佳;
4、反應介質加入2%牛奶可減少非特異性吸附,提高檢測靈敏度;
5、有機溶劑中甲醇對ELISA反應的影響較小,反應體系中zui終含量10%為佳;
6、HRP酶作為顯色反應的催化劑比AP酶更為理想;
7、包被抗原直接競爭ELISA模式OD值的平行性不如包被抗體直接競爭ELISA模式的好;
在以上條件下優(yōu)化出的穩(wěn)定劑可使包被在酶標板上的抗體在37±1℃條件下保存14天而抗體活性基本保持不變。
 利用優(yōu)化后的分析條件,建立了農(nóng)藥三唑磷異源直接競爭ELISA方法(包被抗體模式)和克百威直接競爭ELISA方法(包被二抗模式)。在考察了不同樣品基質對ELISA方法的影響后,進一步對蔬菜樣品、水果樣品、水、土等環(huán)境樣品進行了三唑磷和克百威添加回收率試驗,檢測結果進行了統(tǒng)計分析,考察了方法的準確度與精密度,并對不同處理組間、相同處理組板間的檢測數(shù)據(jù)進行了顯著性檢驗,確定了不同樣品的方法本底值、zui低檢測限及檢測結果陰性/陽性判定方法,zui終構建了三唑磷ELISA快速測定試劑盒和克百威ELISA檢測試劑盒

 

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